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Dss perdita di peso. Indagare infiammazione intestinale in DSS-indotta Modello di IBD

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Abstract La malattia infiammatoria intestinale IBD comprende una vasta gamma di patologie intestinali, le più comuni delle quali sono la colite ulcerosa UC e la malattia di Crohn CD. Ci sono modelli animali numerosi e variabili di infiammazione del colon che assomigliano a diverse caratteristiche di IBD.

Modelli animali di colite gamma da quelli che nascono spontaneamente in ceppi sensibili di alcune specie a quelli che richiedono la somministrazione di dss perdita di peso specifiche di colite che inducono prodotti chimici, come il sodio destrano solfato DSS.

Chimica indotta modelli di infiammazione dell'intestino sono i modelli più comunemente utilizzati e meglio descritta di IBD. Animali dato DSS perdita di peso e mostrano segni di feci molli o diarrea, a volte con evidenza di sanguinamento rettale. Colon danno istologico viene valutata utilizzando un sistema di dss perdita di peso che considera la perdita di architettura cripta, infiltrazione di cellule infiammatorie, muscolari tascesso hickening, deplezione delle cellule caliciformi, e la cripta.

Nella colite sperimentale, la gravità della malattia è spesso correlato con un aumento dell'attività MPO e più elevati livelli di citochine pro-infiammatorie. Nel loro insieme, queste misure possono essere utilizzate per valutare la risposta infiammatoria intestinalemodelli animali di colite sperimentale. Protocol Log in or Start trial to access full content.

In una cappa di biosicurezza, versare DSS soluzione madre in 50 ml provette Falcon una necessaria per gabbia.

Il cloruro di gadolinio migliora il decorso del TNBS e della colite indotta da DSS proteggendo dall'infiammazione della mucosa del colon Soggetti Malattia infiammatoria intestinale Astratto I macrofagi infiammatori nella mucosa del colon sono i principali motori della patologia associata alla malattia infiammatoria intestinale IBD. Qui abbiamo esaminato se il cloruro di gadolinio GdCl 3un inibitore selettivo dei macrofagi, migliorasse il corso dell'acido 2, 4, 6-trinitro benzene solfonico TNBS e del destrano solfato di sodio DSS nei topi e dei potenziali meccanismi sono stati indagati Dando GdCl 3 a colite topi per via endovenosa o intrarettale, abbiamo scoperto che GdCl 3 ha marcato notevolmente la gravità della colite, tra cui una minore perdita di peso, una diminuzione dei punteggi dell'indice di attività della malattia e un miglioramento del danno alla mucosa. Per studiare i meccanismi potenziali, è stata eseguita un'analisi citofluorimetrica per rilevare la proporzione di macrofagi della mucosa nel colon.

Mantenere la soluzione stock di tubi ricarica quando necessario. Sostituire l'acqua potabile in ogni gabbia del mouse con la soluzione DSS in provette Falcon da 50 ml La durata dipende dal regime DSS che viene utilizzato.

I topi non dovrebbero avere accesso a qualsiasi altra fonte d'acqua.

Disturbi della nutrizione e dell'alimentazione specificati

Topi di controllo sono forniti di acqua potabile senza autoclave DSS. Pesare topi quotidiano e registrare la quantità di DSS consumata al giorno.

Top ognibottiglia da 50 ml dopo la registrazione dei livelli DSS. Questo è quello di misurare il volume approssimativo di DSS consumata per gabbia del mouse per tutta la durata dell'esperimento. Significativa perdita di peso, la consistenza delle feci alterata e segni di sangue fecale sono visti fin dal giorno 3 utilizzando questo particolare regime DSS. Tutti gli esperimenti devono essere approvati dalla dell'istituzione animale comitato etico ed essere in conformità del protocollo approvato utilizzo degli animali AUP.

Il DAI è il punteggio combinato della perdita di peso rispetto al peso iniziale, la consistenza delle feci, e sanguinamento.

Farmacologia Astratto I polisaccaridi naturali sono emersi come una classe importante di composti bioattivi a causa dei loro benefici effetti biologici. Qui abbiamo studiato gli effetti protettivi e curativi di rhamnogalacturonan RGal isolati da foglie di Rans Jansen di Acmella oleracea L. RK in un modello sperimentale di infiammazione intestinale nei topi e in cellule eterogenee di adenocarcinoma epiteliale del colon-retto umano Caco I risultati hanno dimostrato che il trattamento con RGal per 7 giorni ha ridotto la gravità della colite indotta da DSS proteggendo i topi dalla perdita di peso, dal danno macroscopico e dalla riduzione della lunghezza del colon. Rispetto al gruppo DSS, RGal ha anche protetto l'epitelio del colon e promosso il mantenimento degli enterociti della mucosa e delle cellule caliciformi che secernono muco, oltre a conservare l'omeostasi del collagene e ad aumentare la proliferazione cellulare.

Nel punto in tempo di scelta, peso e sacrificio topi. I topi possono essere eutanasia da dislocazione cervicale a seguito di inalazione di isoflurano o altro metodo riconosciuto da stabulario dell'istituto. A questo punto, fare riferimento alla Tabella 1 e fare atto di unany segni di sanguinamento rettale sangue presente al orifizio anale o prolasso rettale in ogni animale.

Uso standard forbici dissezione di incidere l'addome facendo una incisione ventrale linea mediana. Individuare i due punti e transetto i due punti più vicino possibile al margine del colon-retto più possibile per liberare il colon distale. Attentamente e lentamente tirare fuori tutto il colon, distogliendolo dalle mesentere circostante. Transetto i due punti perdita di peso indiranagar margine colonocecal per liberare l'estremità prossimale del colon.

Indagare infiammazione intestinale in DSS-indotta Modello di IBD

Utilizzando l'intero colon, per valutare i danni vedi Sezione 3. Valutazione della gravità colite Punteggio di gravità macroscopica o malattia terminale è valutata da un osservatore imparziale dss perdita di peso un sistema di punteggio precedentemente pubblicato Tabella 1.

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Utilizzando il sistema di punteggio, determinano un punteggio per ciascuna delle condizioni. Il punteggio finale macroscopico per ogni animale è la somma di ogni punteggio individuale. Va notato che a differenza dell'uomo UC, ascessi cripta non sono caratteristici di questo modello e si vedono raramente; ulcerazioni microscopiche sono anche rari. Se le sezioni più due punti sono statimacchiato, punteggi tra sezioni istologiche simili dovrebbero essere usati per determinare il punteggio finale per ogni area cioè punteggio istologico nel colon prossimale rispetto al punteggio istologico nel colon distale.

Quando richiesto, il calore di ri-sciogliere. Triton X è molto viscoso a temperatura ambiente e, quindi, dovrebbe essere riscaldato delicatamente prima dell'uso.

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Preparazione dei campioni per le analisi La preparazione del campione per l'analisi MPO. I campioni devono essere conservati in ghiaccio in ogni momento. E 'importante notare che i frammenti del colon simili dovrebbero essere usati da ogni replica biologici ad esempio sezioni sezioni distale o prossimale solo solo.

Aggiungi omogeneizzatore tallone ad ogni provetta. Se il peso del tessuto è inferiore a 25 mg, aggiungere la soluzione tampone con un rapporto di Omogeneizzare con un omogeneizzatore tessuto per 4 min a 30 Hz. Ripetere se il tessuto non è completamente omogeneizzato. Rimuovere omogeneizzatore tallone e la soluzione di centrifuga per 6 min Raccogliere ed eliminare il surnatante risultante pellet.

La preparazione del campione per l'analisi delle citochine. Ripetere i passaggi 5.

Aggiungere 50 ml di cocktail di inibitori delle proteasi PIC a 10 mL di tampone di lisi preparata. Aggiungere 1 ml del PIC e di soluzione tampone di lisi per ogni campione a prescindere dal peso.

Omogeneizzare per 5 min a 30 Hz. Quantificazione di marker infiammatori Attività di test MPO Preparare o-dianisidina dicloridrato o-dianisidina soluzione combinando 16,7 mg di o-dianisidina dicloridrato, 90 ml di dH 2 O e 10 ml di tampone fosfato di potassio.

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Questa soluzione deve essere preparato fresco per ogni test. Aggiungere 7 ml di tessuto omogenato preparato in paragrafo 5. Utilizzare una pipetta multicanale per aggiungere microlitri della o-dianisidina miscela contenente H 2 O 2 a ciascuno dei pozzi.

Colite ulcerosa Astratto La colite ulcerosa UCun tipo di malattia infiammatoria intestinale IBDè un disturbo infiammatorio cronico del colon. Sebbene l'UC sia generalmente trattata con farmaci antinfiammatori o immunosoppressori, la maggior parte di questi trattamenti si rivela spesso inadeguata.

Misurare l'assorbanza a nm usando uno spettrofotometrotometer. Prendere tre letture ad intervalli di 30 secondi.

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Calcolare l'attività MPO. Per ottenere unità per mg di tessuto, uso del tessuto: rapporto di buffer. Pertanto, per ottenere unità per mg di tessuto, dividere le unità di MPO da 0, Un esempio di calcolo utilizzando i valori di assorbanza nm è riportato qui di seguito assumendo che il campione è stato aggiunto in triplice copia : Campione.